Изучение противоопухолевых свойств мицелия лекарственного гриба Ganoderma lucidum (Рейши) (Curt.: Fr) P. Karst. в опытах in vivo - НП Курсив (812) 363-06-28
НП Курсив (812) 363-06-28

+7 (812) 363-06-28


Изучение противоопухолевых свойств мицелия лекарственного гриба Ganoderma lucidum (Рейши) (Curt.: Fr) P. Karst. в опытах in vivo
 

Бухман В. М., Исакова Е. Б., Антимонова А. В., Белицкий И. В., Либензон А.В., Краснопольская Л. М.

ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе РАМН Москва

Лакированный трутовик (Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P. Karst.) обладает ярко выраженными лечебными свойствами. Наряду с такими важными для использования в медицинской практике эффектами, как антибактериальная, противогрибковая и противовирусная, гиполипидемическая, гипогликемическая и противовоспалительная активность, гриб способен оказывать противоопухолевое действие. Традиционным источником биологически активных метаболитов G. lucidum служат плодовые тела гриба. Именно они на сегодня являются основным сырьем для получения функциональных продуктов на основе этого гриба. Известно, что биологически активные метаболиты G. lucidum содержатся не только в базидиомах, но и в вегетативном мицелии гриба, получаемом при погруженном культивировании. Этот метод, использующий достижения современной биотехнологии, позволяет значительно интенсифицировать процесс получения исходного сырья за счет сокращения его длительности и увеличения выхода целевых метаболитов.

Целью настоящей работы явилось изучение противоопухолевых свойств экстрактов вегетативного мицелия G. lucidum, полученного в условиях погруженной культуры по методу, разработанному в лаборатории биосинтеза биологически активных веществ ГУ НИИНА им. Г.Ф. Гаузе РАМН. В качестве объекта работы был использован штамм G. lucidum коллекции лаборатории. Исследование включило получение препаратов-сырцов, разработку экспериментальной модели и изучение активности полученных препаратов.

Получение препаратов-сырцов. Погруженное культивирование G. lucidum осуществляли по разработанной ранее схеме, варьируя источники углерода в питательной среде. Навеску размолотого до порошкообразного состояния биомассы экстрагировали кипящей водой. Полученный экстракт отделяли фильтрованием и использовали в дальнейших опытах. При этом в экспериментах варьировали время экстракции и соотношение навески мицелиального порошка экстрагента.

Разработка экспериментальной модели. Для обнаружения противоопухолевой активности при работе с неочищенными и нестандартизированными экстрактами необходимо было разработать достаточно чувствительную модель.

При разработке модели исходили из данных литературы, свидетельствующих, что такого типа экстракты проявляют невысокую противоопухолевую активность и их следует вводить длительно, не менее 10 суток, а также что противоопухолевая активность, в основном, определяется стимулированием противоопухолевой резистентности организма.

В результате была выбрана экспериментальная модель развития перевиваемой асцитной Т-лимфомы EL-4 на мышах-гибридах (C57B1/6J r DBA/2)F1 (B6D2F1). Данная тест-система обладает следующими преимуществами. Во-первых, развитие в полусингенных условиях привитой небольшой дозой опухолевых клеток перевиваемой асцитной Т-лимфомы EL-4 обеспечивает медленный рост и достаточно выраженную противоопухолевую реактивность. Во-вторых, модель позволяет осуществлять введение препаратов в место инокуляции опухолевых клеток, что облегчает проявление противоопухолевой активности. В-третьих, при использовании данной модели возможно изменение иммунореактивности организма к лимфоме путем однократного введения малой дозы циклофосфамида с целью удаления супрессорных клеток и облегчения стимулирования противоопухолевой резистентности компонентами экстрактов.

В экспериментах мышам B6D2F1 вводили по 10 4 асцитных клеток лимфомы EL-4 внутрибрюшинно в 0-е сутки, и с 3-их суток начинали ежедневные внутрибрюшинные инъекции водных экстрактов мицелия G. lucidum, которые продолжали несколько недель, в большинстве случаев до гибели большинства мышей. В некоторых экспериментах на 3-и сутки внутрибрюшинно вводили однократно 100мг/кг циклофосфамида (ЦФ).

Изучение противоопухолевых свойств водных экстрактов мицелия G. lucidum с использованием перевиваемой асцитной Т-лимфомы EL-4 на мышах-гибридах (B6D2F1). При проведении исследований анализировали массу тела мышей и количество выживших животных в каждый день эксперимента.

В первом эксперименте мышам вводили водный экстракт мицелия G. lucidum по 0,2,  0,3 и 0,5 мл ежедневно. Изучение параметра массы тела мышей показало, что основное увеличение этого показателя происходит за счет увеличения массы опухолевой ткани. Так, масса тела мышей с привитой опухолью и не получавших лечение достоверно превышала массу тела интактных животных. На 18-й день опыта, когда все животные были живы, масса интактных мышей составила в среднем 119%, мышей, не получавших лечения - 132%, мышей, получавших экстракт мицелия G. lucidum - 108-113% (за 100% принята масса тела в начале опыта).

Таким образом, введение экстракта мицелия гриба достоверно тормозило опухолевый рост по указанному параметру. При этом не было выявлено существенных различий между изученными дозами экстракта.

Сравнение результатов учета выживания мышей в группах, получавших и не получавших лечение, показало, что введение экстракта мицелия G. lucidum достоверно увеличивает продолжительность жизни мышей. Так, на 27-е сутки эксперимента выживаемость мышей, не получавших лечение, составила 10%, а мышей, которым вводили экстракт мицелия G. lucidum - 68%. В изученном диапазоне доз, выживаемость животных, так же, как и изменение массы тела, не зависела от дозы экстракта.

Изменение методики приготовления экстрактов приводило к изменению характера их активности. В отдельных случаях внутрибрюшинное введение экстрактов, полученных по измененной методике, не оказывало влияния на развитие лимфомы или недостоверно уменьшало продолжительность жизни мышей.

В дальнейших опытах в схему экспериментов включили однократное применение низкой дозы циклофосфамида, оказывающей иммуностимуляторный эффект. Сочетание применения циклофосфамида и экстракта мицелия G. lucidum достоверно повышало выживаемость мышей даже по сравнению с позитивным действием циклофосфамида, как единственного лечебного препарата. На 27-е сутки данного эксперимента выживаемость мышей, не получавших лечение , составила 8%, мышей, получавших циклофосфамид - 39%, мышей, получавших циклофосфамид в сочетании с экстрактом мицелия G. lucidum - 84%.

Таким образом, разработана модель перевиваемой асцитной Т-лимфомы EL-4 на мышах-гибридах B6D2F1, которая может быть успешно использована для изучения in vivo противоопухолевой активности базидиальных грибов. Результаты внутрибрюшинного введения изучаемых препаратов показали, что водные экстракты погруженного мицелия G. lucidum обладают противоопухолевыми свойствами, тормозя развитие опухолевой ткани и увеличивая продолжительность жизни мышей с привитой лимфомой. Наличие противоопухолевых свойств препаратов-сырцов мицелия G. lucidum зависит от способа культивирования гриба и экстракции его мицелия. Сочетание одноразового введения низкой дозы циклофосфамида с длительным введением экстракта мицелия G. lucidum усиливало противоопухолевый эффект циклофосфамида.

 

Успехи медицинской микологии, под общей научной редакцией Ю. В. Сергеева

издательство "Национальная Академия Микологии" сайт www.mycology.ru

 

 
Санкт-Петербург, Большой пр.П.С. 29 а, офис 401 , тел. (812) 363-06-28
Free joomla themes
Extensions by Siteground Web Hosting